通用型LAMP试剂盒(免DNA提取)

产品货号：

BTN180805

中文名称：

通用型LAMP试剂盒(免DNA提取)

英文名称：

Universal Visual LAMP Kit(Extraction-free)

产品规格：

50T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本制品是4×LAMP MasterMix和免提取样本DNA释放剂的组合。前者含有可视化LAMP扩增所需的所有成分，可以用于可视化LAMP等温扩增。免提取样本DNA释放剂可用于处理各种样品，直接不经过提取直接用于PCR或LAMP扩增。

即开即用，用户不需要单独准备每个成分。
不需要单独进行核酸纯化，LAMP扩增后可以直接肉眼观察，不需任何设备。
高特异性，精心优化的可视化LAMP MasterMix配方，非特异扩增比自配的LAMP试剂更低。
4×MasterMix，比对应的2×MasterMix能使用能多的扩增模板。如果样品没有抑制物，最多可使用11μL进行扩增，降低漏检的机率。
高扩增效率，一般比PCR灵敏一个数量级。
本试剂盒足够50次免提取样本处理和50次20μL体系的LAMP扩增。
提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。
本制品只能用于科研，不能用于临床。

组分	规格	保存
免提取DNA模板制备溶液A成分1	100μL	RT
免提取DNA模板制备溶液A成分2	100μL
免提取DNA模板制备溶液B	500μL
4×LAMP MasterMix	200μL	-20℃
Bst DNA聚合酶	50μL
阳性对照模板-引物混合物	50μL

打开金属浴或PCR仪，把温度调到95℃。
配制1mL工作液（足够10个样品，如果样品不止10个，需要按比例增加）：在一干净的1.5mL自备塑料离心管中加入10μL免提取模板制备溶液A成分1，20μL免提取模板制备溶液A成分2和970μL超纯水，充分混合均匀待用。溶液A工作液可室温放置，但最好在一周内用完。
标记10个PCR管（方便后续用PCR仪加热保温），分别加入100μL上步所配制的溶液A工作液。
参考下表在管中加入待处理样品。如果是固体样品，需要确保固体样品被溶液A工作液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀即可。动物组织1～5mg、鼠尾2mm、血液样品不超过20μL、植物叶片1～5mg、植物种子1～5mg、0.2～0.5mL微生物培养物离心所得的沉淀、血清血浆等蛋白浓度高的液体样品10～30μL、其他液体样品（如保存液中的病毒样品）50～100μL。对上表未列出的样品，用户需要自己摸索最佳用量。对富含多醌多酚的植物材料（如棉花），使用量最好不要超过0.5mg。
在金属浴或PCR仪上95℃保温10分钟。
待冷却到常温。
每个管中加入10μL溶液B并轻柔吹打混匀得DNA释放液。这些DNA释放液足够进行50-100次PCR或LAMP扩增。

配制5×LAMP引物混合液。
先加超纯水将合成的HPLC级别的下列引物干粉稀释到标准所标注的母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水，最后得到1mL的5×LAMP引物混合液，此混合液足够250次20μL体系的LAMP扩增。如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积异于1mL，则各成分的用量请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置2年。

引物名称	母液浓度	加母液量	在5×LAMP引物混合液中的浓度
FIP引物	100μM	80μL	8μM
BIP引物	100μM	80μL	8μM
F3引物	100μM	10μL	1μM
B3引物	100μM	10μL	1μM
Loop F	100μM	20μL	2μM
Loop B	100μM	20μL	2μM
超纯水		780μL
终体积		1mL

注：如果没有Loop引物，则用水替代。

在冰上融化4×LAMP MasterMix，混匀，稍离心。第一次使用时，请将50μL Bst DNA聚合酶全部加入到4×LAMP MasterMix中轻柔混匀，然后再使用。如果有N个样品，则在N+2个反应管中加入以下组份，多出的一管是LAMP扩增阳性对照（PC），一管是LAMP扩增阴性对照（NC）：

成分	N+2个样品管	LAMP扩增PC	LAMP扩增NC
4×LAMP MasterMix(已加酶)	5μL	5μL	5μL
自备5×LAMP引物混合液	4μL	不加	4μL
阳性对照模板-引物混合物	不加	4μL	不加
自备模板DNA	1～2μL	不加	不加
补自备超纯水到	20μL	20μL	20μL

混匀，置于65℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴或水浴保温，没有热盖，必须覆盖50μL的石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，严重影响反应效率。
扩增结束后肉眼观察结果判断阴性和阳性。典型的结果见下图：左边管为阴性，右边两个管为阳性。
结果分析：如果本试剂盒提供的阳性对照-引物混合物呈现阳性而阴性对照为阴性，则实验有效。如果阳性对照-引物混合物呈现阴性，则操作有问题或者试剂盒有问题，请跟厂家联系。如果阴性对照（水作为模板）也呈现阳性，则说明LAMP样品或试剂有过去的扩增产物的污染，需要注意操作的规范性，如果不能解决，可以重新设计引物扩增新的靶片段。
也可以电泳检测实验结果（强烈不推荐此法，因为电泳时产生的气溶胶非常容易污染环境，使得今后用同一引物扩增时产生假阳性）：取5～10μL扩增产物和自备的上样液混合，上样，进行2～3%的琼脂糖凝胶电泳，有LAMP扩增的样品将可见LAMP特征性电泳图谱。

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